Mejoramiento de un método no comercial para la extracción de ADN de moscas de interés médico-legal

La obtención de ADN de moscas de interés médico-legal es de relevancia para una variedad de aplicaciones. Aunque existen métodos de extracción comerciales de ADN, su uso rutinario es limitado, en algunos escenarios. En este contexto, el uso de métodos no comerciales constituye una alternativa; sin embargo, su optimización es clave para mejorar el flujo de trabajo y los resultados. Este trabajo evaluó el impacto de variaciones a un método de precipitación salina sobre la concentración y la pureza del ADN recuperado. No se encontraron diferencias significativas en la concentración de ADN extraído entre los diferentes tiempos de incubación, probados durante la fase de extracción, mientras que el incremento en el volumen de etanol absoluto, en la fase de precipitación de ADN, mejoró significativamente la concentración de ADN obtenido. Las modificaciones propuestas reducen el tiempo de ejecución y la concentración de ADN obtenido comparado con el protocolo original.

Obtaining DNA from flies of medico-legal interest is relevant for a variety of applications. Although commercial extraction methods offer optimal DNA, their routine use is limited in some settings. In this context, the use of non-commercial methods constitutes an alternative in laboratories with limited resources however, its optimization is key to improving the workflow and the results. This work evaluated the impact of variations to a saline precipitation method on the concentration and purity of the recovered DNA. No significant differences were found in the concentration of extracted DNA between the different incubation times tested during the extraction phase. In contrast, the increased volume of absolute ethanol in the DNA precipitation phase significantly improved the concentration of DNA obtained. The proposed modifications reduce the runtime and DNA concentration obtained compared with the original protocol.

Integrando Universidade e Escola: Relato de experiência da Oficina "Brincando de Geneticista: descobrindo o DNA" / Integrating University and school: Experience report of the Workshop "Playing Geneticist: discovering DNA" / Integración de la universidad y la escuela: informe de experiencia del taller "Jugando Genetista: descubriendo el ADN"

Objetivo: relatar uma experiência didática envolvendo diálogo entre a Universidade e a Escola Pública, por meio da aplicação da oficina pedagógica denominada "Brincando de Geneticista: descobrindo o DNA". Método: A oficina direcionada para alunos da Educação Básica foi realizada na Universidade Estadual de Feira de Santana, durante a Semana Nacional de Ciência e Tecnologia do ano de 2019. A atividade pedagógica foi fundamentada na extração de material genético. Foram utilizados materiais de baixo custo e fácil acesso. Resultados: 80 estudantes Ensino Fundamental II participaram da oficina. Os alunos foram divididos em pequenos grupos, possibilitando maior interação entre estudantes e professor. A oficina de caráter participativo possibilitou que os estudantes pudessem compreender a importância da genética para a vida, além de estimular a interação dos escolares com a Universidade. Ademais, foi observado que muitos escolares apresentam dificuldades para transpor e contextualizar assuntos relacionados a conteúdos celulares e moleculares. Conclusão: No presente trabalho, o uso dessa abordagem didática ampliou a receptividade dos alunos aos conteúdos trabalhados, facilitou o diálogo aluno-professor e se mostrou uma ótima ferramenta de interface entre universidade e escola básica.

Objective: to report a didactic experience involving dialogue between the University and the Public School, through the application of the pedagogical workshop called "Playing Geneticist: discovering the DNA". Method: The workshop directed to students of Basic Education was held at the State University of Feira de Santana, during the National Week of Science and Technology of the year 2019. The pedagogical activity was based on the extraction of genetic material. Low-cost and easy-to-access materials were used. Results: 80 elementary school students participated in the workshop. The students were divided into small groups (12 to 15 students), allowing greater interaction between students and the teacher. The participatory workshop enabled students to understand the importance of genetics for life, in addition to stimulating the interaction of students with the University. Furthermore, it was observed that many students have difficulties in transposing and contextualizing issues related to cellular and molecular content. Conclusion: In the present work, the use of this didactic approach increased the students' receptivity to the contents worked on, facilitated the student-teacher dialogue and proved to be a great interface tool between university and basic school.

Objetivo: reportar una experiencia didáctica que involucra el diálogo entre la Universidad y la Escuela Pública, a través de la aplicación del taller pedagógico llamado "Jugando Genetista: descubriendo el ADN". Método: El taller dirigido a estudiantes de Educación Básica se realizó en la Universidad Estatal de Feira de Santana, durante la Semana Nacional de Ciencia y Tecnología del año 2019. La actividad pedagógica se basó en la extracción de material genético. Se utilizaron materiales de bajo costo y de fácil acceso. Resultados: 80 estudiantes de primaria participaron en el taller. Los alumnos se dividieron en pequeños grupos (de 12 a 15 alumnos), lo que permitió una mayor interacción entre los alumnos y el profesor. El taller participativo permitió a los estudiantes comprender la importancia de la genética para la vida, además de estimular la interacción de los estudiantes con la Universidad. Además, se observó que muchos estudiantes tienen dificultades para transponer y contextualizar cuestiones relacionadas con el contenido celular y molecular. Conclusión: En el presente trabajo, el uso de este enfoque didáctico aumentó la receptividad de los estudiantes a los contenidos trabajados, facilitó el diálogo estudiante-maestro y demostró ser una gran herramienta de interfaz entre la universidad y la escuela básica.

Comparación de métodos de extracción de ADN simples y económicos para el diagnóstico molecular de leptospirosis animal

La leptospirosis bovina es una importante enfermedad zoonótica cuyo diagnóstico molecular está ampliamente divulgado. Sin embargo, no existe un método único de extracción de ADN para leptospiras patógenas a partir de muestras clínicas. En este trabajo se utilizó orina bovina contaminada con cultivo de L. interrogans serovar Pomona Pomona para analizar el mejor método comparando: M1.) resina Chelex-100, M2.) papel FTA Whatman y M3.) hervido de la muestra (protocolo casero). De estas tres técnicas, la primera (M1) presentó la mayor sensibilidad al realizar la PCR de diagnóstico, detectándose hasta 2x102 leptospiras/mL. La metodología aquí planteada resultó tener buen rendimiento para la detección de leptospiras en muestras clínicas animales, aunque es necesario su validación con mayor número y diversidad de muestras.

Bovine leptospirosis is an important zoonotic disease whose molecular diagnosis is widely reported. However, there is not a unique method of extraction of DNA for pathogenic leptospires using clinical samples. In this study, bovine urine was contaminated with pure culture of L. interrogans serovar Pomona Pomona in order to compare three of them: M1.) Chelex-100 resin, M2.) FTA Whatman paper and M3.) boiling of the sample (in-house protocol), being the first one the most sensitive when used in diagnostic PCR, detecting up to 2x102 leptospiras/mL. The methodology proposed in this study turned out to have good performance for the detection of leptospires in animal clinical samples, although it should be applied to a greater number of samples and in different stages of the pathology.

Evaluación de métodos de extracción de ADN bacteriano en muestras fecales de pacientes diagnosticados con infección por Helicobacter pylori / Evaluation of bacterial DNA extraction methods in fecal samples of patients diagnosed with Helicobacter pylori infection

La identificación de microorganismos a través de técnicas moleculares ha tomado granpopularidadenlosúltimosañosgraciasasuprecisión.LaReacciónenCadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica de diagnóstico molecular sumamente valoradaporsurapidezderesultados,altasensibilidadyespecificidad,sinembargo, el rendimiento de esta técnica dependerá de la calidad del ADN extraído. Las muestras fecales contienen una gran cantidad de sustancias, como sales que pueden comportarse como inhibidores para la PCR, por esta razón,se llevó a cabo este estudio donde se evaluaron algunas modificaciones a técnicas de extracción de ADN bacteriano por medio de la metodología fenol-cloroformo en 10 muestras fecales tomadas de pacientes diagnosticados con infección por Helicobacter pylori en el departamento del Atlántico. En el método final se obtuvo una concentración promediode ADN de 1.501,0ng/µl.

Theidentificationofmicroorganismsthroughmoleculartechniqueshasbecomevery popular in recent years due to their accuracy. The Polymerase Chain Reaction (PCR) is a molecular diagnostic technique highly valued for its rapidity of results, high sensitivity and specificity, however, the performance of this technique depends on the quality of the extracted DNA. Fecal samples contain a large number of substances,such as salts that may be have as inhibitors for the PCR, for this reason, this study evaluated some modifications to bacterial DNA extraction techniques of the phenol-chloroform methodology in 10 fecal samples taken from patients diagnosed with infection by Helicobacter pylori in the Department of Atlántico, Colombia. In the final method an average DNA concentration of 1,501.0 ng/µl was obtained

Identificación de microorganismos por reacción en cadena de la polimerasa en necrosis pulpar y periodontitis apical / Identification of microorganisms by polymerase chain reaction in pulp necrosis and apical periodontitis

Objetivos: identificar, mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa, diez especies bacterianas procedentes de conductos radiculares necróticos, así como analizar su asociación con signos y síntomas de la periodontitis apical (dolor, exudado y movilidad), dentro de un área geográfica específica, Santiago de Compostela (noroeste de España). Métodos: se realizó un estudio descriptivo, en un plazo de recogida de muestras de un año. Se extrajeron 43 muestras de los conductos radiculares necróticos, a razón de una muestra por pacientes, quienes fueron examinados previamente para determinar la presencia de periodontitis apical radiográfica, de la cual fueron descritos sus signos y síntomas. Se utilizaron puntas de papel absorbentes estériles y se procedió a extraer de dichas muestras el ADN por medio de la técnica del fenol-cloroformo. El producto se amplificó por medio de la reacción en cadena de la polimerasa, usando cebadores específicos para diez microorganismos. El resultado se visualizó por medio de electroforesis, utilizando un transiluminador UV. Los resultados se analizaron estadísticamente, para así establecer qué microorganismos estaban presentes de forma individual y cuáles se presentaron formando asociaciones como el llamado red complex, en relación con los signos y síntomas presentes en la periodontitis apical. Resultados: Fusobacterium nucleatum fue el microorganismo con presencia de forma individual más frecuente (83,72 por ciento de las muestras). En cuanto al estudio de la asociación de los microorganismos con los signos y síntomas, Porphyromonas endodontalis presentó una asociación significativa con respecto al exudado (p< 0,05) y movilidad (p< 0,05). En cambio, Enterococcus spp. y Treponema denticola (p< 0,01) presentaron ambos una asociación significativa con respecto al dolor. En cuanto a la incidencia del red complex fue de 6 casos en total. Conclusiones: Fusobacterium nucleatum y Streptococcus spp. son los microorganismos identificados con mayor porcentaje en comparación a los restantes estudiados. Porphyromonas endodontalis es el microorganismo con mayor asociación estadística con respecto a los signos y síntomas de la periodontitis apical(AU)

Objectives: identify by polymerase chain reaction technique ten bacterial species obtained from necrotic root canals, and analyze their association with signs and symptoms of apical periodontitis (pain, exudate and mobility) in a specific geographic area: Santiago de Compostela (northwestern Spain). Methods: a descriptive study was conducted based on a one-year sample collection period. Forty-three samples were taken from necrotic root canals, at a rate of one sample per patient, who had been previously examined for radiographic apical periodontitis, of which the signs and symptoms were described. Sterile absorbent paper points were used to extract the DNA samples, applying the phenol-chloroform technique. The product was amplified by polymerase chain reaction, using specific primers for ten microorganisms. The result was visualized by electrophoresis using a UV transilluminator. Outcomes were analyzed statistically to determine which microorganisms were present individually and which formed associations such as the so-called red complex, according to the signs and symptoms present in the apical periodontitis. Results: Fusobacterium nucleatum was the most common individual microorganism (83.72 percent of the samples). As to the association of microorganisms with signs and symptoms, Porphyromonas endodontalis was found to be significantly associated with exudate (p< 0.05) and mobility (p< 0.05), while both Enterococcus spp. and Treponema denticola (p< 0.01) had a significant association with pain. Incidence of the red complex was 6 cases in all. Conclusions: Fusobacterium nucleatum and Streptococcus spp. were the microorganisms identified as displaying the highest percentages. Porphyromonas endodontalis showed the greatest statistical association with signs and symptoms of apical periodontitis(AU)

Identificación de microorganismos por reacción en cadena de la polimerasa en necrosis pulpar y periodontitis apical / Identification of microorganisms by polymerase chain reaction in pulp necrosis and apical periodontitis

Objetivos: identificar, mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa, diez especies bacterianas procedentes de conductos radiculares necróticos, así como analizar su asociación con signos y síntomas de la periodontitis apical (dolor, exudado y movilidad), dentro de un área geográfica específica, Santiago de Compostela (noroeste de España). Métodos: se realizó un estudio descriptivo, en un plazo de recogida de muestras de un año. Se extrajeron 43 muestras de los conductos radiculares necróticos, a razón de una muestra por pacientes, quienes fueron examinados previamente para determinar la presencia de periodontitis apical radiográfica, de la cual fueron descritos sus signos y síntomas. Se utilizaron puntas de papel absorbentes estériles y se procedió a extraer de dichas muestras el ADN por medio de la técnica del fenol-cloroformo. El producto se amplificó por medio de la reacción en cadena de la polimerasa, usando cebadores específicos para diez microorganismos. El resultado se visualizó por medio de electroforesis, utilizando un transiluminador UV. Los resultados se analizaron estadísticamente, para así establecer qué microorganismos estaban presentes de forma individual y cuáles se presentaron formando asociaciones como el llamado red complex, en relación con los signos y síntomas presentes en la periodontitis apical. Resultados: Fusobacterium nucleatum fue el microorganismo con presencia de forma individual más frecuente (83,72 por ciento de las muestras). En cuanto al estudio de la asociación de los microorganismos con los signos y síntomas, Porphyromonas endodontalis presentó una asociación significativa con respecto al exudado (p< 0,05) y movilidad (p< 0,05). En cambio, Enterococcus spp. y Treponema denticola (p< 0,01) presentaron ambos una asociación significativa con respecto al dolor. En cuanto a la incidencia del red complex fue de 6 casos en total. Conclusiones: Fusobacterium nucleatum y Streptococcus spp. son los microorganismos identificados con mayor porcentaje en comparación a los restantes estudiados. Porphyromonas endodontalis es el microorganismo con mayor asociación estadística con respecto a los signos y síntomas de la periodontitis apical(AU)

Objectives: identify by polymerase chain reaction technique ten bacterial species obtained from necrotic root canals, and analyze their association with signs and symptoms of apical periodontitis (pain, exudate and mobility) in a specific geographic area: Santiago de Compostela (northwestern Spain). Methods: a descriptive study was conducted based on a one-year sample collection period. Forty-three samples were taken from necrotic root canals, at a rate of one sample per patient, who had been previously examined for radiographic apical periodontitis, of which the signs and symptoms were described. Sterile absorbent paper points were used to extract the DNA samples, applying the phenol-chloroform technique. The product was amplified by polymerase chain reaction, using specific primers for ten microorganisms. The result was visualized by electrophoresis using a UV transilluminator. Outcomes were analyzed statistically to determine which microorganisms were present individually and which formed associations such as the so-called red complex, according to the signs and symptoms present in the apical periodontitis. Results: Fusobacterium nucleatum was the most common individual microorganism (83.72 percent of the samples). As to the association of microorganisms with signs and symptoms, Porphyromonas endodontalis was found to be significantly associated with exudate (p< 0.05) and mobility (p< 0.05), while both Enterococcus spp. and Treponema denticola (p< 0.01) had a significant association with pain. Incidence of the red complex was 6 cases in all. Conclusions: Fusobacterium nucleatum and Streptococcus spp. were the microorganisms identified as displaying the highest percentages. Porphyromonas endodontalis showed the greatest statistical association with signs and symptoms of apical periodontitis(AU)

Establecimiento y evaluación de dos métodos de pre tratamiento de muestras de suelo para la extracción de ADN para el estudio de la diversidad bacteriana / Establishment and evaluation of two methods of pre-treatment of soil samples for the extraction of DNA for the study of bacterial diversity

La necesidad de ampliar los conocimientos respecto a los mecanismos bioquímicos y fisiológicos desarrollados por los microorganismos presentes en suelos requiere de una descripción completa de la diversidad microbiana, para lo cual en las últimas décadas se han desarrollado diferentes técnicas moleculares (qPCR, DGGE, T-RFLP, RAPD.) las mismas que requieren una adecuada técnica de extracción de ADN que aseguren el éxito de la descripción de la diversidad microbiana, considerando las características de las muestras de suelos a ser estudiadas. Los protocolos de extracción de ADN generalmente utilizados están basados en la separación de los microorganismos de la matriz antes de la extracción de ADN mediante lisis física o química y por otro lado, la extracción directa del ADN microbiano a partir de muestras de suelo, sin embargo la presencia de sustancias húmicas y fenólicas afectan la calidad del ADN extraído, lo que repercuten en el desarrollo de posteriores estudios moleculares. La finalidad de este estudio fue la de establecer procedimientos de pre tratamientos de 3 tipos de nuestras de suelo (arenoso, arcilloso y francos) para posteriormente describir la riqueza y diversidad bacteriana de las muestras en estudio mediante PCR DGGE. De esta manera se determinó que la adición de CaCO3 en muestras de suelos francos permite la identificación de una mayor diversidad y riqueza bacteriana (10 bandas). Asimismo, la adición de PVPP a suelos arenosos (8 bandas) y arcillosos (3 bandas) también permite obtener las características descritas anteriormente utilizando el método PCR-DGGE. Lo cual indica que los procedimientos de pre tratamiento con CaCO3 y PVPP son específicos para la extracción de ciertas comunidades microbianas.

The knowledge about biochemical and physiological mechanisms by microorganisms in soils are required for a complete description of microbial diversity, lately different molecular techniques have been developed to study this feature (qPCR, DGGE, T- RFLP, RAPD). DNA extraction techniques ensure the description of the microbial diversity success, according the soil samples characteristics. Generally, DNA extraction protocols used for separation of microorganism of matrix soil before DNA extraction by physical and chemical lysis. Other protocol is direct extraction of microbial DNA from soil samples, humic acids and phenolic substances affect the quality of DNA, which affect the development of subsequent molecular studies. The purpose of this study was to establish pretreatment procedures for different kind of soil samples (frank, sandy and clayey) in order to describe richness and bacterial diversity by PCR DGGE. In this sense, we determined the addition of CaCO3 in frank soils samples allows the identification of greater diversity and bacterial richness (10 bands) than the other method. Besides, PVPP pretreatment is no only useful to obtain bacterial diversity in sandy soil (8 bands), but also in clayey soils (3 bands) soils by PCR-DGGE method. This indicates that the pretreatment procedures with CaCO3 and PVPP are specific for soil microbial community's isolation.

Extracción de ADN de muestras incluidas en parafina sin el uso de xilol para la detección y tipificación de VPH / DNA extraction from paraffin embedded samples without using xylene for HPV detection and typing

En el presente trabajo se llevó a cabo la extracción de ADN de biopsias cervicales con informe citológico de lesión intraepitelial cervical, incluidas en bloques de parafina, utilizando el “QIAamp DNA mini kit” (QIAGEN, Alemania) y la detección del Virus de Papiloma Humano (VPH). En el procedimiento original se eliminó la incubación en xilol, reduciendo los lavados del material biológico; la calidad de los ADNs extraídos fue probada mediante PCR para la detección del gen de la β-globina y del VPH, obteniéndose 84,3% y 28,1% de positividad, respectivamente. Estos resultados fueron comparables a los de otros trabajos similares y evidencian la obtención de ADN celular amplificable por PCR a partir de muestras parafinadas, que pudo ser utilizado eficientemente en procedimientos moleculares, eliminando la toxicidad del xilol y disminuyendo la manipulación del material biológico al reducir los lavados.

In the present study, DNA from cervical biopsies with a cytological report of intraepithelial cervical lesion and embedded in paraffin blocks was extracted using the “QIAamp DNA mini kit” (QIAGEN, Germany), and the Human Papyloma Virus (HPV) was detected. In the original procedure, the xylene incubation was eliminated, therefore reducing the washes of the biological material; the quality of the DNA extracted was tested by PCR for detecting the β-globine gene and HPV, with 84.3% and 28.1% positivity, respectively. These results were comparable to those of other similar studies, and they demonstrate that it is possible to obtain PCR amplifiable cellular DNA from paraffin embedded samples which can be used efficiently for molecular procedures, eliminating xylene toxicity, and decreasing the manipulation of the biological material by reducing washes.

Estandarización de un protocolo sencillo para la extracción de ADN genómico de levaduras / Standardising a simple protocol for extracting yeast from genomic DNA

Se estandarizó un protocolo rápido, sencillo y de bajo costo para la extracción de ADN genómico de levaduras a partir de lisis de la pared celular mediante tratamiento enzimático y precipitación por alcoholes. El empleo de la enzima Beta-glucoronidasa en reemplazo de la enzima Zimolasa, permitió obtener ADN en alta concentración (124,9±30,2 ng/λl) y de buena calidad (A260/A280 nm =1,86±0,1), ideal para su uso en estudios de biología molecular. Además, se adicionó un paso de incubación del ADN obtenido a 100° C para inactivar ADNasas. La calidad del ADN obtenido fue evaluada por medio de la amplificación de la región ITS1-5.8S-ITS2, presentando bandas definidas y cuantificables (entre 380 y 880 pb) ideales para estudios de identificación molecular y filogenia.

A quick, simple and low-cost protocol for extracting genomic DNA from yeast by cell wall lysis involving enzymatic treatment and alcoholic precipitation was standardised. Higher DNA yields (124.9±30.2 ng/λl) were obtained by using beta-glucuronidase instead of zymolyase; these had very high quality (A260/A280 nm = 1.86±0.1) and would be suitable for use in molecular biology assays. Moreover, a DNAse inactivation step was also introduced by incubation at 100 °C to further ensure DNA stability. DNA quality was assayed by PCR amplification of the ITS1-5.8S-ITS2 region, revealing defined, quantifiable 380 to 880 bp bands. These results show that the protocol is ideal for molecular identification and phylogenetic studies.

Analisis de la inestabilidad de microsatélites mediante el marcador BAT-26 en una muestra de pacientes del Hospital Universitario de Santander con diagnóstico de cancer gastrico o colorrectal / Microsatellite instability analysis using BAT-26 marker in patients with gastric or colorectal cancer diagnosed at Hospital Universitario de Santander

Introducción: La vía de inestabilidad de microsatélites se ha encontrado sobre todo en canceres de vías digestivas, de los cuales 90% de los casos pertenecen a pacientes con cancer hereditario y 15% con cancer esporadico. De ella se deriva un fenotipo denominado de inestabilidad de microsatélites (IMI+) o fenotipo de error de la replicación (RER+) que induce a la acumulación de mutaciones en tasas mas elevadas a las normales. Objetivos: Identificar la presencia del fenotipo IMI+ en los pacientes analizados y evaluar su relación con la diferenciación histopatológica del tumor porque en conjunto han sido asociados con un mejor pronóstico y una mejor respuesta al tratamiento dado. Metodología: Se extrajo ADN de las muestras de sangre (células normales) y las biopsias de tumor (células tumorales) de los 23 pacientes que se pudieron incluir para el estudio y mediante la amplificación por PCR y posterior electroforesis capilar; se tipificó el microsatélite mononucleotídico BAT-26, empleado por su sensibilidad para descubrir el fenotipo IMI+. Finalmente se hizo una correlación estadística según la presencia (IMI+) o ausencia (IMI-) del fenotipo, con los hallazgos histopatológicos utilizando la prueba exacta de Fisher. Resultados: Del total de pacientes, 4 (17%) presentaron IMI+: 3 de ellos con cßncer colorrectal (2 casos posiblemente con cßncer hereditario) y uno con cancer gßstrico. No se encontró ninguna asociación entre el fenotipo IMI+ con el diagnostico patológico, la edad, el sexo y la diferenciación histopatológica del tumor. Conclusión: Se encontró el fenotipo IMI+ en 17% de los casos, sin asociación con el grado de diferenciación histopatológica del tumor, posiblemente por el reducido número de muestras tipificadas, por lo cual es indispensable revisar los métodos de fijación, parafinación y almacenamiento de tejidos, pues las técnicas actuales dificultan la digestión de la proteinaza k y la PCR.

Introduction: The path of microsatellite instability has mainly been found in cancers of digestive tracts, of which 90% of cases are hereditary cancer patients and 15% are patients with sporadic cancer. That instability produces a phenotype called Microsatellite instability (IMI+) or phenotype by replication mistake (RER+) that leads to the accumulation of mutations in higher rates to normal. Objectives: To identify the presence of IMI+ phenotype in patients analyzed and evaluated its relationship with the differentiation histopathologic tumor, because which together have been associated with a better prognosis and improved response to treatment given to the patient. Methodology: DNA was extracted from blood samples (normal cells) and biopsy of the tumor (tumor cells) of the 23 patients who were included in the study and through the amplification by PCR and subsequent capillary electrophoresis was typified the microsatellite mononucleotidic BAT-26, who was employed by his sensitivity to detect IMI+ phenotype (95%). Finally, we made a statistical correlation between the microsatellite instability phenotype, the presence (IMI+) or the absence (IMI-), with histopathological findings using FisherÆs exact test. Results: In 17% of cases (4 patients) had IMI+: 3 of them with colorectal cancer (CRC) -2 cases possibly with hereditary cancer- and one with gastric cancer (GC). There was no association between phenotype IMI+ with the pathological diagnosis, age, sex and differentiation histopathologic tumor. Conclusion: We found the phenotype IMI + in 17% of cases without association with the degree of differentiation histopathologic tumor, possibly by the reduced number of samples analyzed, making it essential to review the methods of fixation, paraffin and storage tissue because current techniques hinder digestion of proteinase k and PCR.

Comparación entre 5 métodos para la extracción de ADN de Triatomíneos: su utilización en la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar (RAPD) / Comparison among 5 methods for the extraction of Triatominae DNA: its use in the random amplified polymorphic DNA technique

Se evaluó la aplicabilidad de 5 protocolos útiles para la extracción del ADN genómico de Triatomíneos, y se describió el método del acetato de potasio modificado, como un método con el que se obtiene un alto rendimiento y pureza del ADN en el menor tiempo y costo, para su utilización como molde en la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar (RAPD [la cual es un método simple para detectar el polimorfismo genético del ADN]) y probablemente en otras técnicas moleculares basadas en la amplificación por la reacción en cadena de la polimerasa. La calidad del ADN constituye un elemento crucial para esta técnica, la cual necesita un método de extracción de ADN lo más estandarizado posible con el que se obtenga un ADN puro, no degradado, libre de ARN y de inhibidores de la reacción en cadena de la polimerasa: porque cambios en la pureza afectan los perfiles de amplificación y esto se manifiesta en la presencia de bandas falsas y en la poca reproducibilidad del ensayo.

The applicability of 5 protocols useful for the extraction of genomic DNA of triatominae was evaluated and the modified potassium acetate method was described as a method with which a high yield and purity of DNA is obtained in the shortest time and at the lowest cost to be used as a mold in the random amplified polymorphic DNA technique (simple method to detect the DNA genetic polymorphism) and probably in other molecular techniqeus based in the PCR amplification. The DNA quality is a crucial element for this technique, which needs a DNA extraction method as standardized as possible to obtain a pure non degraded DNA free of RNA and of PCR inhibitors, because changes in the purity can affect the amplification profiles and this is manifested in the presence of false bands and in the little reproducibility of the assay.